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CM  Focurose HPL適用于分離純化生物大分子，例如PEG化蛋白、病毒等。

1 產(chǎn)品介紹

特點(diǎn)：

a.大孔徑，載量高。

b.兼容性好，適合各種規(guī)模生物分子的中度純化或精細(xì)純化。

c.純化工藝靈活性高，可以和疏水層析組合使用。

表1：CM Focurose HPL 性能參數(shù)

2 選擇指導(dǎo)

2.1 離子交換介質(zhì)的選擇

圖1：離子交換介質(zhì)的選擇

說(shuō)明：

a.當(dāng)目標(biāo)物所在溶液的pH?目標(biāo)物的等電點(diǎn)時(shí)，選擇陽(yáng)離子交換介質(zhì)。

b.當(dāng)目標(biāo)物所在溶液的pH?目標(biāo)物的等電點(diǎn)時(shí)，選擇陰離子交換介質(zhì)。

c.所使用溶液的pH應(yīng)該在離子交換介質(zhì)的使用pH范圍以內(nèi)。

2.2 緩沖溶液的選擇

表2：陰離子交換緩沖液

表3：陽(yáng)離子交換緩沖液

說(shuō)明：

a.按照表2和表3選擇緩沖溶液的種類和濃度。

b.錯(cuò)誤的緩沖液（種類和濃度）會(huì)干擾分離效果(如分離度、載量、pH波動(dòng)等)。

c.所使用緩沖液的pH應(yīng)該在離子交換介質(zhì)的使用pH范圍內(nèi)。

d.使用分析純或者更高純度的緩沖液。

e.在溶液配制后，須經(jīng)過(guò)濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過(guò)濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過(guò)濾；平均粒徑>165μm，用0.8μm過(guò)濾）和脫氣處理（超聲或負(fù)壓）。

3 樣品的制備

樣品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液稀釋或透析/超濾/G25進(jìn)行緩沖液置換。

樣品過(guò)濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過(guò)濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過(guò)濾；平均粒徑>165μm，用   0.8μm過(guò)濾）。

4 純化流程（以XK16/10為例）

采用液滴對(duì)液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。

用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗5CV（CV指柱床體積，下同）。

用洗脫液以5ml/min的流速?zèng)_洗5CV。

用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗10CV。

將樣品以5ml/min的流速上樣。

用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗10CV。

用洗脫液以5ml/min洗脫5CV或20CV(根據(jù)前期篩選實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用階梯式洗脫5CV/線性梯度洗脫20CV)。

用再生液以5ml/min的流速?zèng)_洗5CV。

備注：再生液=平衡液+1M NaCl，其它組分不變。

5 放大

保持柱床高度不變

5.2 保持線性流速不變

備注：若實(shí)際情況和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)有偏差，可以維持停留時(shí)間不變。

6 維護(hù)

6.1平衡

柱子裝填完成后，用平衡液以60cm/h的流速?zèng)_洗5CV或沖洗至電導(dǎo)和pH值恒定。

6.2再生

每次分離純化后，用再生液以60cm/h的流速?zèng)_洗5CV或沖洗至電導(dǎo)和pH值恒定。

6.3在位清洗

在位清洗用于清洗再生沒(méi)有清洗干凈的物質(zhì)，例如脂類、沉淀物、變性蛋白。

a.強(qiáng)離子結(jié)合蛋白

用2.0M NaCl以60cm/h的流速反向沖洗5CV。

b.沉淀物、疏水結(jié)合蛋白、脂蛋白

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。

c.脂類、強(qiáng)疏水蛋白。

用1.0M NaOH，30%異丙醇以30cm/h的流速反向沖洗5CV

6.4消毒

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。

6.5滅菌

將介質(zhì)置換到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中進(jìn)行高壓滅菌。

6.6保存

介質(zhì)在20%乙醇中4-30℃保存。

7 訂購(gòu)信息

表4：訂購(gòu)信息表

備注：大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購(gòu)買，請(qǐng)咨詢本公司當(dāng)?shù)劁N售或售前技術(shù)支持。