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產(chǎn)品展示

Ni Focurose HPL(IDA)

價 格:詢價

規(guī) 格:25ml/100ml/500ml/1L/5L/20L

產(chǎn) 地:中國

貨 號:HQ220311001L

品 牌:匯研生物


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產(chǎn)品概述

   為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作,使用前請仔細閱讀本手冊,有任何疑問請咨詢本公司售后技術(shù)支持或當?shù)氐匿N售人員(聯(lián)系方式見附錄)。

 

1.產(chǎn)品介紹

Ni Focurose HPL(IDA)是利用Ni2+與蛋白質(zhì)側(cè)鏈上的某些氨基酸(主要為組氨酸、半胱氨酸、色氨酸)相互作用而進行分離純化,適用于His標簽蛋白及與Ni2+具有相互作用的大生物分子的分離純化。

特點:

a.快速、簡單(一步純化)。

b.使用范圍廣、操作簡單,適合重力柱和預(yù)裝柱(蠕動泵或者層析系統(tǒng))。

c.多重選擇,當Ni2+不能獲得較好的應(yīng)用時,可以螯合其它的金屬離子進行使用(例如Cu2+、Zn2+、Fe2+、Co2+、Ca2+等)。

d.大孔微球,生物大分子樣品載量較高。

備注:當螯合Ca2+時,避免使用磷酸鹽緩沖液(會形成沉淀)。

 

表1:Ni Focurose HPL(IDA)性能參數(shù)

基質(zhì)

高剛性瓊脂糖

粒徑范圍

45-165μm

平均粒徑

≈75μm

結(jié)合載量

≥20mg(His標簽蛋白)/ml(介質(zhì))

pH穩(wěn)定性*        

3-12(長期) 2-14(短期)

化學穩(wěn)定性**

所有常用水溶液和緩沖液

避免使用螯合劑(例如EDTA、EGTA)和還原劑(例如DTT和DTE)

流速

300cm/h

操作壓力

≤0.3MPa

貯存溶液

20%乙醇

貯存溫度

4-30℃

*:此處穩(wěn)定性指的是在未螯合金屬離子時介質(zhì)的穩(wěn)定性。

**:Ni Focurose HPL(IDA)在使用過程中,避免使用螯合劑和還原劑。

 

2.溶液制備

平衡液:0.02M PB、0.5M NaCl、0.02-0.04M Imidazole,pH 7.4。

洗脫液:0.02M PB、0.5M NaCl、0.5M Imidazole,pH 7.4。

備注:當純化包涵體時,溶液中要添加8M Urea或6M Gua-HCl。


3.樣品制備

3.1樣品所在溶液要和平衡液保持一致,可以用平衡液進行裂解、透析/超濾/G25進行緩沖液置換。

3.2樣品過濾(平均粒徑<45μm,用0.22μm過濾;45μm<平均粒徑<165μm,用0.45μm過濾;平均粒徑>165μm,用   0.8μm過濾)。

4.純化流程(以XK16/10為例)

采用液滴對液滴(避免引入氣泡)的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。

4.2 用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。

4.3 用洗脫液以5ml/min的流速沖洗5個CV。

4.4 用平衡液以5ml/min的流速沖洗10個CV。

4.5 將樣品以5ml/min的流速上樣。

4.6 用平衡液以5ml/min的流速沖洗至紫外吸收值平穩(wěn)(10-15個CV)。

4.7 用洗脫液以5ml/min的流速洗脫5CV或20CV(階梯式洗脫5CV/線性梯度洗脫20CV)。

 

5.再生(以XK16/10為例)

5.1用純化水以5ml/min的流速沖洗10個CV。

5.2用剝離液以5ml/min的流速沖洗10個CV。

5.3 用平衡液以5ml/min的流速沖洗10個CV。

5.4 用純化水以5ml/min的流速沖洗10個CV。

5.5 用0.1M NiSO4以 5ml/min的流速沖洗5個CV。

5.6 用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。

5.7 用平衡液以5ml/min的流速沖洗5個CV。

5.8 用20%乙醇以5ml/min的流速沖洗5個CV。

備注:剝離液,0.02M PB、0.5M NaCl、0.05 EDTA,pH 7.4。

 

6.清洗(以XK16/10為例)

6.1 參照5.1-5.4操作將Ni2+剝離。

6.2 用1.5M NaCl以5ml/min的流速沖洗10個CV。

6.3 用純化水以5ml/min的流速沖洗10個CV。

6.4 用1.0M NaOH以2.5ml/min的流速沖洗30個CV。

6.5 用平衡液以5ml/min的流速沖洗10個CV。

6.6 用純化水以5ml/min的流速沖洗10個CV。

6.7 用30%異丙醇以2.5ml/min的流速沖洗10個CV。

6.8 參照5.4-5.8操作將Ni2+螯合。

 

7.常見問題

表2:常見問題及解決方案

問題

可能原因

解決方案

純化時目標物不與介質(zhì)結(jié)合

或結(jié)合量較低

1.上樣量過載

降低上樣量

2.上樣流速過快

降低上樣流速

3.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集影響結(jié)合

及時有效地清洗介質(zhì)或更換新的介質(zhì)

4.表達條件過于劇烈,His標簽被包裹,不能與介質(zhì)結(jié)合

建議做一個空載體作為表達和純化的對照,確定表達條件是否合適

5.初始樣品中沒有組氨酸標簽蛋白

通過基因序列或His標簽抗體核實

6.目標蛋白出現(xiàn)在流穿中

目標蛋白沒有成功表達或樣品與平衡液中pH及組分不正確

洗脫時沒有收集到目標物

或只收集到少量目標物

1.目標物沒有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少

先確認目標物是否與介質(zhì)結(jié)合

2.洗脫條件不合適

加大洗脫液中咪唑濃度

3.洗脫時間不夠

降低流速,延長洗脫液的保留時間

4.洗脫體積過小

加大洗脫體積

5.洗雜時,目的蛋白被洗下來

降低洗雜液中的咪唑濃度

6.目標物在洗脫液條件下出現(xiàn)聚集沉淀

檢測目標物在洗脫液條件(pH和鹽濃度)下的溶解度和穩(wěn)定性。可以嘗試在洗脫液中加入一些添加劑:如0.2% Triton X-100或0.5% Tween 20

目標物純度較低

 

1.樣品沒有經(jīng)過前處理

樣品上柱前必須要經(jīng)過離心或過濾

2.樣品粘度過高

用平衡液適當?shù)南♂寴悠?,降低粘度?/span>

3.洗雜不徹底

加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致

4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀

及時有效地清洗介質(zhì)

5.雜質(zhì)與Ni2+具有較高的親和力。

用其它類型介質(zhì)進行純化(如離子或分子篩)

6.目標物出現(xiàn)降解

檢測目標物的穩(wěn)定性并加入蛋白酶抑制劑

7.柱料裝填效果不佳

重新裝填或購買

8.雜質(zhì)與介質(zhì)出現(xiàn)非特異性吸附

適當選擇添加劑降低非特異性吸附,可以嘗試在樣品中加入一些添加劑:如0.5%Triton X-100、1.0% Tween 20或50%甘油

9.分離柱頂部有較大儲樣體積

重新裝柱或降低儲樣體積

10.介質(zhì)中有微生物生長

介質(zhì)使用完后,請及時正確保存介質(zhì)

介質(zhì)載量下降

1.上樣流速過快

降低上樣流速

2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集,導致載量下降。

及時清洗介質(zhì)

3.使用次數(shù)過多

更換新介質(zhì)

4.表達條件過于劇烈,His標簽被包裹,不能較好與介質(zhì)結(jié)合

建議做一個空載體作為表達和純化的對照,確定表達條件是否合適

色譜峰上升過陡

介質(zhì)裝填過緊

重新裝柱

色譜峰上升過緩或拖尾

介質(zhì)裝填太松

重新裝柱

柱床有裂縫或干涸

出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入

檢查管路是否有泄露或氣泡,重新裝柱

液流較慢

1.蛋白或脂類聚集

及時清洗介質(zhì)或濾膜

2.蛋白沉淀在介質(zhì)中

調(diào)整平衡液和洗脫液組分,以維持目標物的穩(wěn)定性和介質(zhì)的結(jié)合效率

3.分離柱中微生物生長

所用試劑必須經(jīng)過過濾和脫氣;

樣品上柱前必須離心或過濾

 

 

8.訂購信息

表3:訂購信息表

產(chǎn)品

規(guī)格

貨號

Ni Focurose HPL(IDA)

25ml

HQ220311025M

Ni Focurose HPL(IDA)

100ml

HQ220311100M

Ni Focurose HPL(IDA)

500ml

HQ220311500M

Ni Focurose HPL(IDA)

1L

HQ220311001L

Ni Focurose HPL(IDA)

5L

HQ220311005L

Ni Focurose HPL(IDA)

20L

HQ220311020L

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Ni Focurose HPL(IDA)

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Ni Focurose HPL(IDA)

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