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產(chǎn)品展示

Ni Focurose HPL(IMAC)

價(jià) 格:詢價(jià)

規(guī) 格:25ml/100ml/500ml/1L/5L/20L

產(chǎn) 地:中國(guó)

貨 號(hào):HQ220312001L

品 牌:匯研生物


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產(chǎn)品概述

   為確保產(chǎn)品的性能和無(wú)憂的操作,使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本手冊(cè),有任何疑問(wèn)請(qǐng)咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員(聯(lián)系方式見(jiàn)附錄)。

 

1.產(chǎn)品介紹

Ni Focurose HPL(IMAC)是利用Ni2+與蛋白質(zhì)側(cè)鏈上的某些氨基酸(主要為組氨酸、半胱氨酸、色氨酸)相互作用而進(jìn)行分離純化,適用于His標(biāo)簽蛋白及與Ni2+具有相互作用的大生物分子的分離純化。

特點(diǎn):

a.快速、簡(jiǎn)單(一步純化)。

b.使用范圍廣、操作簡(jiǎn)單,適合重力柱和預(yù)裝柱(蠕動(dòng)泵或者層析系統(tǒng))。

c.多重選擇,可以螯合各種金屬離子進(jìn)行使用(例如Cu2+、Zn2+、Fe2+、Co2+、Ca2+等)。

d.相對(duì)于IDA Focurose HPL 來(lái)說(shuō),Ni2+脫落低、試劑兼容性廣(見(jiàn)表2)。

e.大孔微球,生物大分子樣品載量較高。

備注:當(dāng)螯合Ca2+時(shí),避免使用磷酸鹽緩沖液(會(huì)形成沉淀)。

 

表1:Ni Focurose FF(IMAC)性能參數(shù)

基質(zhì)

高剛性瓊脂糖

粒徑范圍

45-165μm

平均粒徑

≈75μm

結(jié)合載量

≥25mg(His標(biāo)簽蛋白)/ml(介質(zhì))

pH穩(wěn)定性*        

3-12(長(zhǎng)期) 2-14(短期)

化學(xué)穩(wěn)定性**

所有常用水溶液和緩沖液

避免使用螯合劑(例如EDTA、EGTA)和還原劑(例如DTT和DTE)

流速

300cm/h

操作壓力

≤0.3MPa

貯存溶液

20%乙醇

貯存溫度

4-30℃

*:此處穩(wěn)定性指的是在未螯合金屬離子時(shí)介質(zhì)的穩(wěn)定性。


表2:常用試劑兼容性

緩沖液

0.05M sodium phosphate, pH 7.4

0.1M Tris-HCl, pH 7.4

0.1M Tris-acetate, pH 7.4

0.1M HEPES, pH 7.4

0.1M MOPS, pH 7.4

0.1M sodium acetate, pH 4

變性劑

8M Urea

6M Gua-HCl

去污劑

2% Triton X-100

2% Tween 20

2% NP-40

2% Cholate

1% CHAPS

還原劑*

0.005M DTE

0.005M DTT

0.02M β-mercaptoethanol

0.005M TCEP

0.01M reduced glutathione

其它添加劑

0.5M Imidazole

20% Ethanol

50% Glycerol

0.1M Na2SO4

1.5M NaCl

0.001M EDTA**

0.06M Citrate

 

2.溶液制備

平衡液:0.02M PB、0.5M NaCl、0.02-0.04M Imidazole,pH 7.4。

洗脫液:0.02M PB、0.5M NaCl、0.5M Imidazole,pH 7.4。

備注:當(dāng)純化包涵體時(shí),溶液中要添加8M Urea或6M Gua-HCl。


3.樣品制備

3.1樣品所在溶液要和平衡液保持一致,可以用平衡液進(jìn)行裂解、透析/超濾/G25進(jìn)行緩沖液置換。

3.2樣品過(guò)濾(平均粒徑<45μm,用0.22μm過(guò)濾;45μm<平均粒徑<165μm,用0.45μm過(guò)濾;平均粒徑>165μm,用   0.8μm過(guò)濾)。

 

4.純化流程(以XK16/10為例)

采用液滴對(duì)液滴(避免引入氣泡)的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)或蠕動(dòng)泵或注射器上。

4.2 用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。

4.3 用洗脫液以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。

4.4 用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。

4.5 將樣品以5ml/min的流速上樣。

4.6 用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗至紫外吸收值平穩(wěn)(10-15個(gè)CV)。

4.7 用洗脫液以5ml/min的流速洗脫5CV或20CV(階梯式洗脫5CV/線性梯度洗脫20CV)。

 

5.再生(以XK16/10為例)

5.1用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。

5.2用剝離液以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。

5.3 用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。

5.4 用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。

5.5 用0.1M NiSO4以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。

5.6 用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。

5.7 用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。

5.8 用20%乙醇以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。

備注:剝離液,0.02M PB、0.5M NaCl、0.05 EDTA,pH 7.4。

 

6.清洗(以XK16/10為例)

6.1 參照5.1-5.4操作將Ni2+剝離。

6.2 用1.5M NaCl以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。

6.3 用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。

6.4 用1.0M NaOH以2.5ml/min的流速?zèng)_洗30個(gè)CV。

6.5 用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。

6.6 用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。

6.7 用30%異丙醇以2.5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。

6.8 參照5.4-5.8操作將Ni2+螯合。

 

7.常見(jiàn)問(wèn)題

表3:常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

問(wèn)題

可能原因

解決方案

純化時(shí)目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合

或結(jié)合量較低

1.上樣量過(guò)載

降低上樣量

2.上樣流速過(guò)快

降低上樣流速

3.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集影響結(jié)合

及時(shí)有效地清洗介質(zhì)或更換新的介質(zhì)

4.表達(dá)條件過(guò)于劇烈,His標(biāo)簽被包裹,不能與介質(zhì)結(jié)合

建議做一個(gè)空載體作為表達(dá)和純化的對(duì)照,確定表達(dá)條件是否合適

5.初始樣品中沒(méi)有組氨酸標(biāo)簽蛋白

通過(guò)基因序列或His標(biāo)簽抗體核實(shí)

6.目標(biāo)蛋白出現(xiàn)在流穿中

目標(biāo)蛋白沒(méi)有成功表達(dá)或樣品與平衡液中pH及組分不正確

洗脫時(shí)沒(méi)有收集到目標(biāo)物

或只收集到少量目標(biāo)物

1.目標(biāo)物沒(méi)有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少

先確認(rèn)目標(biāo)物是否與介質(zhì)結(jié)合

2.洗脫條件不合適

加大洗脫液中咪唑濃度

3.洗脫時(shí)間不夠

降低流速,延長(zhǎng)洗脫液的保留時(shí)間

4.洗脫體積過(guò)小

加大洗脫體積

5.洗雜時(shí),目的蛋白被洗下來(lái)

降低洗雜液中的咪唑濃度

6.目標(biāo)物在洗脫液條件下出現(xiàn)聚集沉淀

檢測(cè)目標(biāo)物在洗脫液條件(pH和鹽濃度)下的溶解度和穩(wěn)定性。可以嘗試在洗脫液中加入一些添加劑:如0.2% Triton X-100或0.5% Tween 20

目標(biāo)物純度較低

 

1.樣品沒(méi)有經(jīng)過(guò)前處理

樣品上柱前必須要經(jīng)過(guò)離心或過(guò)濾

2.樣品粘度過(guò)高

用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠罚档驼扯取?/span>

3.洗雜不徹底

加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致

4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀

及時(shí)有效地清洗介質(zhì)

5.雜質(zhì)與Ni2+具有較高的親和力。

用其它類型介質(zhì)進(jìn)行純化(如離子或分子篩)

6.目標(biāo)物出現(xiàn)降解

檢測(cè)目標(biāo)物的穩(wěn)定性并加入蛋白酶抑制劑

7.柱料裝填效果不佳

重新裝填或購(gòu)買

8.雜質(zhì)與介質(zhì)出現(xiàn)非特異性吸附

適當(dāng)選擇添加劑降低非特異性吸附,可以嘗試在樣品中加入一些添加劑:如0.5%Triton X-100、1.0% Tween 20或50%甘油

9.分離柱頂部有較大儲(chǔ)樣體積

重新裝柱或降低儲(chǔ)樣體積

10.介質(zhì)中有微生物生長(zhǎng)

介質(zhì)使用完后,請(qǐng)及時(shí)正確保存介質(zhì)

介質(zhì)載量下降

1.上樣流速過(guò)快

降低上樣流速

2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集,導(dǎo)致載量下降。

及時(shí)清洗介質(zhì)

3.使用次數(shù)過(guò)多

更換新介質(zhì)

4.表達(dá)條件過(guò)于劇烈,His標(biāo)簽被包裹,不能較好與介質(zhì)結(jié)合

建議做一個(gè)空載體作為表達(dá)和純化的對(duì)照,確定表達(dá)條件是否合適

色譜峰上升過(guò)陡

介質(zhì)裝填過(guò)緊

重新裝柱

色譜峰上升過(guò)緩或拖尾

介質(zhì)裝填太松

重新裝柱

柱床有裂縫或干涸

出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入

檢查管路是否有泄露或氣泡,重新裝柱

液流較慢

1.蛋白或脂類聚集

及時(shí)清洗介質(zhì)或?yàn)V膜

2.蛋白沉淀在介質(zhì)中

調(diào)整平衡液和洗脫液組分,以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性和介質(zhì)的結(jié)合效率

3.分離柱中微生物生長(zhǎng)

所用試劑必須經(jīng)過(guò)過(guò)濾和脫氣;

樣品上柱前必須離心或過(guò)濾



8.訂購(gòu)信息

表4:訂購(gòu)信息表

產(chǎn)品

規(guī)格

貨號(hào)

Ni Focurose HPL(IMAC)

25ml

HQ220312025M

Ni Focurose HPL(IMAC)

100ml

HQ220312100M

Ni Focurose HPL(IMAC)

500ml

HQ220312500M

Ni Focurose HPL(IMAC)

1L

HQ220312001L

Ni Focurose HPL(IMAC)

5L

HQ220312005L

Ni Focurose HPL(IMAC)

20L

HQ220312020L

備注:大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購(gòu)買,請(qǐng)咨詢本公司當(dāng)?shù)劁N售或售前技術(shù)支持。


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