價(jià) 格：詢價(jià)
規(guī) 格：25ml/100ml/500ml/1L/5L/20L
產(chǎn) 地：中國(guó)
貨 號(hào)：HQ030317001L
品 牌：匯研生物
為確保產(chǎn)品的性能和無(wú)憂的操作，使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本手冊(cè)，有任何疑問(wèn)請(qǐng)咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員（聯(lián)系方式見(jiàn)附錄）。
1.產(chǎn)品介紹
Benzamidine Focurose 4FF(HS)適用于分離純化胰蛋白酶、凝血酶、腸激酶、尿激酶、前激肽釋放酶(激肽釋放酶原），也可用于快速去除細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)菌裂解產(chǎn)物、血清中的絲氨酸類蛋白酶。
特點(diǎn)：
a.快速、簡(jiǎn)單（一步純化）。
b.載量高。
c.易于放大。
表1：性能參數(shù)
基質(zhì) | 高度交聯(lián)4%的瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 45-165μm |
平均粒徑 | 90±5μm |
配基 | ≧30uM對(duì)氨基苯甲脒/ml(介質(zhì)) |
結(jié)合載量 | ≥35mg(胰蛋白酶)/ml(介質(zhì)) |
pH穩(wěn)定性 | 1-9（短期） 2-8（長(zhǎng)期） |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 所有常用緩沖溶液、8M尿素、6M鹽酸胍 |
流速 | ≧250cm/h |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
貯存溶液 | 0.05M醋酸鹽緩沖液、20%乙醇，pH 4.0 |
貯存溫度 | 4-8℃ |
2.溶液配制
平衡液：0.05M Tris-HCl、0.5M NaCl，調(diào)節(jié)pH 7.4。
洗脫液Ⅰ：0.05M Glycine，pH 3.0（推薦）。
洗脫液Ⅱ ：0.01M HCl、0.5 M NaCl，pH 2.0（當(dāng)洗脫效果不佳時(shí)采用）。
洗脫液Ⅲ ：0.05M Tris-HCl、0.5M NaCl、0.02M 對(duì)氨基苯甲脒，pH 7.4（當(dāng)目標(biāo)物對(duì)低pH敏感時(shí)，可以采用此種洗脫方式；對(duì)氨基苯甲脒在A280時(shí)有較高的吸光值，須用SDS-PAGE或其它檢測(cè)方法檢測(cè)洗脫液中組分）。
中和液：1.0M Tris-HCl，pH 9.0（使用洗脫液Ⅰ和洗脫液Ⅱ洗脫時(shí)，每毫升收集液中加入60-200ul中和液）。
3.樣品制備
3.1樣品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液進(jìn)行裂解、透析/超濾/G25進(jìn)行緩沖液置換。
3.2樣品過(guò)濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過(guò)濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過(guò)濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過(guò)濾）。
4.純化流程（以XK16/10為例）
4.1采用液滴對(duì)液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。
4.2用純化水以5ml/min沖洗10CV。
4.3用平衡液以5ml/min沖洗10CV。
4.4將樣品以1.0ml/min上樣，上樣完成后用平衡液進(jìn)行清洗直至基線平穩(wěn)。
4.5用洗脫液以5ml/min洗脫10CV，并收集洗脫液。
4.6用純化水以5ml/min沖洗5CV。
4.7用保存液以5ml/min沖洗后保存。
5.放大
保持柱床高度不變
5.2 保持線性流速不變
備注：若實(shí)際情況和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)有偏差，可以維持停留時(shí)間不變。
6.清洗
清洗后可以去除一些強(qiáng)結(jié)合性物質(zhì)（例如一些強(qiáng)結(jié)合的蛋白、變性物質(zhì)、沉淀等），從而達(dá)到恢復(fù)介質(zhì)的優(yōu)良性能（例如載量、流動(dòng)性、柱效等）。
建議每使用5次后進(jìn)行一次清洗，具體清洗頻率需根據(jù)純化的初始樣品的潔凈度進(jìn)行調(diào)整。
a.用1.0% Triton X-100沖洗5CV，用純化水沖洗10CV。
b.用6M鹽酸胍沖洗5CV，用純化水沖洗10CV。
c.用20%乙醇沖洗5CV后保存。
7.常見(jiàn)問(wèn)題
表2：常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
問(wèn)題 | 可能原因 | 解決方案 |
純化時(shí)目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合 或結(jié)合量較低 | 1.上樣量過(guò)載 | 降低上樣量 |
2.上樣流速過(guò)快 | 降低上樣流速 | |
3.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集 | 及時(shí)有效地清洗介質(zhì)或更換新的介質(zhì) | |
4.樣本或平衡液中pH不在正確的范圍 | 保證樣本和平衡液pH在6.5-8.0以內(nèi) | |
洗脫時(shí)沒(méi)有收集到目標(biāo)物 或只收集到少量目標(biāo)物 | 1.目標(biāo)物沒(méi)有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少 | 先確認(rèn)目標(biāo)物是否與介質(zhì)結(jié)合 |
2.洗脫條件不合適 | 更換洗脫液（選擇上述使用步驟中推薦的洗脫液使用） | |
3.洗脫時(shí)間不夠 | 降低流速，延長(zhǎng)洗脫液的保留時(shí)間 | |
4.洗脫體積過(guò)小 | 加大洗脫體積 | |
5.目標(biāo)物在洗脫液條件下出現(xiàn)聚集沉淀 | 檢測(cè)目標(biāo)物在洗脫液條件（pH）下的溶解度和穩(wěn)定性。 | |
目標(biāo)物純度較低
| 1.樣品沒(méi)有經(jīng)過(guò)前處理 | 樣品上柱前必須要經(jīng)過(guò)離心或過(guò)濾 |
2.樣品粘度過(guò)高 | 用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠?，降低粘度?/span> | |
3.洗雜不徹底 | 加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致 | |
4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀 | 及時(shí)有效地清洗介質(zhì) | |
5.洗脫條件不佳，洗脫流速太快、梯度太陡。 | 優(yōu)化洗脫條件 | |
6.目標(biāo)物出現(xiàn)降解 | 檢測(cè)目標(biāo)物的穩(wěn)定性 | |
7.柱料裝填效果不佳 | 重新裝填或購(gòu)買 | |
8.雜質(zhì)出現(xiàn)非特異性吸附 | 適當(dāng)選擇添加劑降低非特異性吸附 | |
9.分離柱頂部有較大儲(chǔ)樣體積 | 重新裝柱或降低儲(chǔ)樣體積 | |
10.介質(zhì)中有微生物生長(zhǎng) | 介質(zhì)使用完后，請(qǐng)及時(shí)正確保存介質(zhì) | |
介質(zhì)載量下降 | 1.上樣流速過(guò)快 | 降低上樣流速 |
2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集，導(dǎo)致載量下降。 | 及時(shí)清洗介質(zhì) | |
3.使用次數(shù)過(guò)多，配基被氧化或脫落 | 及時(shí)清洗介質(zhì)或更換新介質(zhì) | |
色譜峰上升過(guò)陡 | 介質(zhì)裝填過(guò)緊 | 重新裝柱 |
色譜峰上升過(guò)緩或拖尾 | 介質(zhì)裝填太松 | 重新裝柱 |
柱床有裂縫或干涸 | 出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入 | 檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱 |
液流較慢 | 1.蛋白或脂類聚集 | 及時(shí)清洗介質(zhì)或?yàn)V膜 |
2.蛋白沉淀在介質(zhì)中 | 調(diào)整平衡液和洗脫液組分，以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性和介質(zhì)的結(jié)合效率 | |
3.分離柱中微生物生長(zhǎng) | 所用試劑必須經(jīng)過(guò)過(guò)濾和脫氣； 樣品上柱前必須離心或過(guò)濾 |
8.訂購(gòu)信息
表3：訂購(gòu)信息表
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
Benzamidine Focurose 4FF(HS） | 25ml | HQ030317025M |
Benzamidine Focurose 4FF(HS） | 100ml | HQ030317100M |
Benzamidine Focurose 4FF(HS） | 500ml | HQ030317500M |
Benzamidine Focurose 4FF(HS） | 1L | HQ030317001L |
Benzamidine Focurose 4FF(HS） | 5L | HQ030317005L |
Benzamidine Focurose 4FF(HS） | 20L | HQ030317020L |
備注：大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購(gòu)買，請(qǐng)咨詢本公司當(dāng)?shù)劁N售或售前技術(shù)支持。
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