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Phenyl Focurose HP

價(jià) 格：詢價(jià)

規(guī) 格：25ml/100ml/500ml/1L/5L/20L

產(chǎn) 地：中國

貨號：HS060202001L

品牌：匯研生物

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產(chǎn)品概述

為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作，使用前請仔細(xì)閱讀本手冊，有任何疑問請咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員（聯(lián)系方式見附錄）。

1.產(chǎn)品介紹

Phenyl Focurose HP偶聯(lián)的疏水性配基在高離子強(qiáng)度條件下（高離子強(qiáng)度會增加配基和疏水性基團(tuán)的相互作用）可以與蛋白質(zhì)或抗體表面的一些疏水性基團(tuán)進(jìn)行相互作用，從而達(dá)到分離純化的目的。Phenyl Focurose HP 主要用于中度純化和精細(xì)純化。

預(yù)裝柱需聯(lián)合層析系統(tǒng)或蠕動泵或注射器使用。

特點(diǎn)：

a.快速、簡單（一步純化）。

b.與反相層析相比，疏水作用層析介質(zhì)上的配基濃度低，洗脫條件溫和，有助于保持分子的生物活性。

c.應(yīng)用廣，可以單獨(dú)中度純化和精細(xì)純化，又可以和離子交換介質(zhì)組合使用。

d.高分辨率。

表1：性能參數(shù)

基質(zhì)	高度交聯(lián)6%的瓊脂糖
粒徑范圍	25-45μm
平均粒徑	35±5μm
配基濃度	25umol/ml（介質(zhì)）
pH穩(wěn)定性	2-14（短期） 3-13（長期）
化學(xué)穩(wěn)定性	所有常用緩沖溶液，1M乙酸、1M氫氧化鈉、8M尿素、6M鹽酸胍、30%異丙醇、70%乙醇
流速	≥150cm/h
貯存溶液	20% 乙醇
貯存溫度	4-30℃

表2：影響疏水層析的因素

影響因素	作用機(jī)理	處理建議
配基結(jié)構(gòu)	不同的配基與蛋白的結(jié)合能力強(qiáng)弱不同	建議預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選合適的介質(zhì)
配基濃度	配基濃度越高結(jié)合能力越強(qiáng)	建議預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇最優(yōu)配基濃度
樣品性質(zhì)	蛋白質(zhì)的疏水性強(qiáng)弱取決于其表面疏水基團(tuán)的分布	/
鹽的濃度	鹽濃度越高，配基和蛋白質(zhì)結(jié)合的越牢固，但過高的鹽濃度會導(dǎo)致蛋白沉淀	檢測不同鹽濃度下蛋白的溶解性和穩(wěn)定性
鹽的種類	不同類型的鹽會產(chǎn)生不同的結(jié)合效果	優(yōu)先選擇(NH4)2SO4和NaCl
溫度	溫度越高，蛋白疏水性越強(qiáng)	必須要維持同樣的溫度，建議維持室溫
pH	過高的或過低的pH會影響蛋白質(zhì)的溶解性和穩(wěn)定性，并且pH會影響結(jié)合效果	在保證蛋白的溶解性和穩(wěn)定的前提下，建議pH范圍在5.0-8.5

2.溶液制備

平衡液：0.05M PB、1.70M (NH4)2SO4，pH 7.0。

洗脫液：0.05M PB，pH 7.0。

3.樣品制備

3.1樣品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液進(jìn)行稀釋、透析/超濾/G25進(jìn)行緩沖液置換。

3.2樣品過濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過濾）。

4.純化流程（以XK16/10為例）

采用液滴對液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。

用平衡液以5ml/min的流速沖洗5CV（CV指柱床體積，下同）。

用洗脫液以5ml/min的流速沖洗5CV。

用平衡液以5ml/min的流速沖洗10CV。

將樣品以5ml/min的流速上樣。

用平衡液以5ml/min的流速沖洗10CV。

用洗脫液以5ml/min洗脫5CV或20CV(根據(jù)前期篩選實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用階梯式洗脫5CV/線性梯度洗脫20CV)。

用純化水以5ml/min的流速沖洗5CV。

5.放大

保持柱床高度不變

5.2 保持線性流速不變

備注：若實(shí)際情況和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)有偏差，可以維持停留時(shí)間不變。

6.維護(hù)

6.1平衡

柱子裝填完成后，用平衡液以60cm/h的流速沖洗5CV或沖洗至電導(dǎo)和pH值恒定。

6.2再生

每次分離純化后，用純化水以60cm/h的流速沖洗5CV。

6.3在位清洗

在位清洗用于清洗再生沒有清洗干凈的物質(zhì)，例如脂類、沉淀物、變性蛋白。

a.沉淀物

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。

b.脂類、強(qiáng)疏水蛋白。

用1.0M NaOH，30%異丙醇以30cm/h的流速反向沖洗5CV

6.4消毒

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。

6.5滅菌

將介質(zhì)置換到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中進(jìn)行高壓滅菌。

6.6保存

介質(zhì)在20%乙醇中4-30℃保存。

7.常見問題

表3：常見問題及解決方案

問題	可能原因	解決方案
純化時(shí)目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較低	1.上樣量過載	降低上樣量
	2.上樣流速過快	降低上樣流速
	3.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集	及時(shí)有效地清洗介質(zhì)或更換新的介質(zhì)
	4.平衡液中鹽濃度較低或目標(biāo)物疏水性較弱	加大平衡液中鹽濃度或更換鹽的種類或更換結(jié)合能力更強(qiáng)的疏水介質(zhì)
洗脫時(shí)沒有收集到目標(biāo)物或只收集到少量目標(biāo)物	1.目標(biāo)物沒有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少	先確認(rèn)目標(biāo)物是否與介質(zhì)結(jié)合
	2.洗脫時(shí)間不夠	降低流速，延長洗脫液的保留時(shí)間
	3.洗脫體積過小	加大洗脫體積
	4.目標(biāo)物和介質(zhì)結(jié)合強(qiáng)度太高	降低平衡液中鹽濃度或更換鹽的種類或或更換結(jié)合能力較弱的疏水介質(zhì)在洗脫液中加入添加劑（少量去污劑或者低濃度有機(jī)試劑）
目標(biāo)物純度較低	1.樣品沒有經(jīng)過前處理	樣品上柱前必須要經(jīng)過離心或過濾
	2.樣品粘度過高	用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠?，降低粘度?/span>
	3.洗雜不徹底	加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致
	4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀	及時(shí)有效地清洗介質(zhì)
	5.洗脫條件不佳，洗脫流速太快、梯度太陡。	優(yōu)化洗脫條件
	6.柱料裝填效果不佳	重新裝填或購買
	7.分離柱頂部有較大儲樣體積	重新裝柱或降低儲樣體積
	8.介質(zhì)選擇性不合適	篩選合適的疏水介質(zhì)
	9.介質(zhì)中有微生物生長	介質(zhì)使用完后，請及時(shí)正確保存介質(zhì)
介質(zhì)載量下降	1.上樣流速過快	降低上樣流速
	2.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集，導(dǎo)致載量下降。	及時(shí)清洗介質(zhì)
	3.使用次數(shù)過多，配基被氧化或脫落	及時(shí)清洗介質(zhì)或更換新介質(zhì)
色譜峰上升過陡	介質(zhì)裝填過緊	重新裝柱
色譜峰上升過緩或拖尾	介質(zhì)裝填太松	重新裝柱
柱床有裂縫或干涸	出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入	檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱
液流較慢	1.蛋白或脂類聚集	及時(shí)清洗介質(zhì)或?yàn)V膜
	2.目標(biāo)物沉淀在介質(zhì)中	調(diào)整平衡液和洗脫液組分，以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性
	3.分離柱中微生物生長	所用試劑必須經(jīng)過過濾和脫氣、樣品上柱前必須離心或過濾

8.訂購信息

表4：訂購信息表

產(chǎn)品	規(guī)格	貨號
Phenyl Focurose HP	25ml	HS060202025M
Phenyl Focurose HP	100ml	HS060202100M
Phenyl Focurose HP	500ml	HS060202500M
Phenyl Focurose HP	1L	HS060202001L
Phenyl Focurose HP	5L	HS060202005L
Phenyl Focurose HP	20L	HS060202020L